欧博集团学院 | “蛋白置换法”结合ICP-MS检测尿液中银离子浓度

发布时间：

2020-08-07

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摘要：

通过“蛋白置换法”，可以分步实现尿液中银离子的解聚和解吸附，有效解决银离子非特异性吸附和严重残留的难题，提高生物基质中金属离子的提取效率，改善ICP-MS在金属离子欧博集团官网物中的欧博集团官网代动力学检测应用。

前处理是检测金属离子的关键

银离子欧博集团官网物的杀菌机理，是通过游离的Ag+结合细胞等微生物中蛋白质的自由疏基（可逆结合），改变蛋白表面电荷，使蛋白质变性而凝固，破坏细胞合成酶活性，细胞因丧失分裂增殖能力而死亡。

大部分银离子欧博集团官网物的使用浓度趋近于痕量（低至μg/ml或ng/ml），无疑对银离子浓度的检测灵敏度和准确性提出了挑战。电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）是检测银离子等金属离子的首�。Ｓτ糜谕寥�、化妆品、水体、农作物、食品等基体干扰较低的基质中，如何有效的排除或降低尿液、血浆等生物基质中的银离子检测干扰，是开发相关检测方法必须解决的问题。

以尿液这类水溶液基质来说，它含有大量水分，少量无机盐、尿素、尿酸等，以及含量很低的蛋白质和葡萄糖。在碱性尿液中，带正电荷的银离子极易吸附在表面带负电荷的容器上（如玻璃、聚丙烯或聚苯乙烯），普通超声处理和微波消解难以有效解除吸附。此外，由于胆汁排泄是消除银的主要方式，而不是经肾排泄，如需从尿液中检测到银，需要前处理方法非常高效的富集极低浓度银离子。

当前的消解法等前处理方法主要局限在于：

①处理方法简单，多采用硝酸一步直接稀释，或增加固相萃�。且胱蛹孜皆诠鼙诨蛘咻腿≈�，解吸附效果差；

②解吸附的银离子在富集过程中，易再次发生吸附而损失，次而产生残留效应，难以适用于银离子欧博集团官网物的定量研究。因此，开发一种改进的生物基质中银离子富集方法具有现实意义。

“蛋白置换法”前处理方法原理

基于上述的尿液中银离子富集难题，欧博集团生物分析测试中心技术团队开发了“蛋白置换法”前处理方法，利用蛋白-银离子螯合物的聚合能力强于银离子与管壁的非特异性吸附能力，同时，该螯合物又可以通过pH的改变实现聚合和解聚，实现对生物基质中银离子进行高效富集，相关原理见下图。实施过程包括：

1）尿液样本与少量稀硝酸经一定比例混合，改变尿液的pH值为弱碱性或中性，解吸附容器管壁上的大部分银离子；

2）加入一定量蛋白溶液，利用蛋白与银离子等金属物质在弱碱性或中性环境下的吸附作用力，远大于容器管壁与银离子吸附作用力的特征，1个蛋白分子可结合n个银离子，置换结合容器管壁上、部分游离在溶液中的银离子，形成蛋白-银离子螯合物；

3）加入适当倍率的稀硝酸，改变尿液的pH为酸性，解聚蛋白-银离子螯合物，形成类似硝酸银之类的易溶解型硝酸盐，解离后的蛋白还可依靠空间位阻来阻断银离子与管壁的再吸附，获得全部游离型银离子；

4）采用适当分离技术，将存在于倍率稀硝酸体系的游离型银离子转移到低吸附容器中，进样检测。

▲ “蛋白置换法”原理

方法准确度和精密度验证

对5种浓度质控品通过2天连续3批前处理，结合ICP-MS验证本方法检测尿液中银离子浓度的准确度（回收率）和精密度（重复性）。结果表明：5个不同浓度银质控品，各重复测定6次的准确度偏差不超过标示值的-2.61%~5.23%，均符合±15%之内的接受标准；各浓度下的银质控品，6次测量结果批内、批间精密度CV%在0.76%~1.93%，均符合≤15%的接受标准，验证了本方法的准确度和精密度符合PK定量要求。

小结

欧博集团生物分析测试中心利用银离子在pH为弱碱性或中性时与蛋白的结合力更强于与容器管壁的结合力，蛋白-银离子等金属螯合物在碱性下结合、在酸性条件下完全解离的原理，摸索出“蛋白置换法”，有效解决了尿液中银离子测不准，难重复的问题，方法验证合格。

目前，相关方法已形成技术专利且应用到实际样本PK定量研究，同时结合临床试验联盟、自主开发的LIMS信息化系统和严谨的数据统计团队等自身优势资源，更好的服务于临床评价，欢迎咨询合作。

参考文献

[1] Lin YS, Rothen ML, Milgrom P.Pharmacokinetics of 38% topical silver diamine fluoride in healthy adult volunteers [J].J Am Dent Assoc，2019,150(3):186-192

[2] 长沙欧博集团生物科技有限责任公司，一种生物基质中银离子富集方法、定量试剂盒及检测方法[P],2020105001519

作者：侯利平

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